高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。
 

　　儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中做相對運動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出，通過(guò)檢測器時(shí)，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來(lái)。
 

　　分配系數與組分、流動(dòng)相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)，也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機制中，K有不同的概念:
 

　　吸附色譜法為吸附系數，離子交換色譜法為選擇性系數 (或稱(chēng)交換系數)，凝膠色譜法為滲透參數。但一般情況可用分配系數來(lái)表示。
 

　　在條件(流動(dòng)相、固定相、溫度和壓力等)一定，樣品濃度很低時(shí)(Cs、Cm很小)時(shí)，K只取決于組分的性質(zhì)，而與濃度無(wú)關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰;
 

　　在許多情況下，隨著(zhù)濃度的增大，K減小，這時(shí)色譜峰為拖尾峰;而有時(shí)隨著(zhù)溶質(zhì)濃度增大，K也增大，這時(shí)色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能減少進(jìn)樣量，使組分在柱內濃度降低，K恒定時(shí)，才能獲得正常峰。
 

　　在同一色譜條件下，樣品中K值大的組分在固定相中滯留時(shí)間長(cháng)，后流出色譜柱;K值小的組分則滯留時(shí)間短，先流出色譜柱。
 

　　混合物中各組分的分配系數相差越大，越容易分離，因此混合物中各組分的分配系數不同是色譜分離的前提。
 

　　在HPLC中，固定相確定后，K主要受流動(dòng)相的性質(zhì)影響。實(shí)踐中主要靠調整流動(dòng)相的組成配比及pH值，以獲得組分間的分配系數差異及適宜的保留時(shí)間，達到分離的目的。